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本文件確立了畜禽飼料安全性評價中的蛋雞飼養(yǎng)試驗程序，規(guī)定了試驗方案設計、飼糧配制、試驗實施、數(shù)據(jù)采集、統(tǒng)計分析、試驗報告和資料存檔等階段的操作指引。
本文件適用于飼料原料、飼料添加劑安全性評價的蛋雞飼養(yǎng)試驗。
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GB 5749 生活飲用水衛(wèi)生標準
GB 13078 飼料衛(wèi)生標準
GB/T 14699.1 飼料 采樣
NY/T 33 雞飼養(yǎng)標準
NY/T 388 畜禽場環(huán)境質(zhì)量標準
NY/T 823 家禽生產(chǎn)性能名詞術語和度量計算方法
本文件沒有需要界定的術語和定義。
4.1 飼養(yǎng)試驗程序的構成
蛋雞飼養(yǎng)試驗程序包括6個階段，分別為試驗方案設計、飼糧配制、試驗實施、數(shù)據(jù)采集、統(tǒng)計分析和試驗報告。
4.2 試驗方案設計
4.2.1 試驗方案構成
飼養(yǎng)試驗開始前，根據(jù)受試物特性及有效劑量進行試驗方案設計。試驗方案包括試驗動物及免疫程序、試驗分組及重復數(shù)、處理設置、飼糧配方、試驗期、觀察與檢測和方案確認。
4.2.2 試驗動物及免疫程序
4.2.2.1 確定試驗動物的信息，包括品種、日齡、生產(chǎn)階段和健康狀況、動物來源和種群規(guī)模；試驗蛋雞應來自于同品種（系）、同日齡、同批次和生產(chǎn)性能相近的健康蛋雞。
4.2.2.2 根據(jù)試驗目的和要求，制定試驗動物免疫程序。
4.2.3 試驗分組及重復數(shù)
遵循隨機、重復和局部控制的原則進行試驗動物分組。各試驗組和對照組的試驗重復數(shù)應滿足數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析的要求。每個處理組包括不少于6個重復，每個重復不少于10只。試驗開始時，處理組間、處理內(nèi)重復組間蛋雞的初始體重、生產(chǎn)性能差異均不顯著。
4.2.4 處理設置
4.2.4.1 試驗分組
試驗至少應包括三個組，即對照組、有效劑量組和多倍劑量組。
4.2.4.2 試驗劑量
試驗劑量按以下原則確定：
a）一般情況下，有效劑量組應選用最高限量。如果沒有最高限量，應選用最高推薦劑量。如果沒有最高推薦量，應根據(jù)受試物的自身特性，選擇最低推薦劑量的2倍～5倍作為有效劑量。
b）多倍劑量組一般選用上述有效劑量的10倍。
c) 如果受試物的耐受劑量低于有效劑量的10倍，安全性評價試驗應能通過尸檢、組織病理學以及其他適宜的試驗方法提出反映受試物毒性的特異性指標，并計算出受試物的安全系數(shù)。
4.2.5 飼糧配方
根據(jù)受試物特點、使用方法，按照NY/T 33或相應蛋雞品種（系）飼養(yǎng)標準確定飼糧配方，對照組飼糧中通常不宜含有受試物；但對于某些動物機體的必需營養(yǎng)素（如氨基酸、維生素、微量元素等），對照飼糧中該營養(yǎng)素水平應低于動物需要量、但又不至于因為該營養(yǎng)素嚴重缺乏引起死淘率增加。
4.2.6 試驗期
試驗期依據(jù)試驗目的和要求確定。育雛育成期飼養(yǎng)試驗應從1日齡開始，試驗期不低于35d；產(chǎn)蛋期飼養(yǎng)試驗從16周齡～21周齡開始，試驗期不低于56d。如果受試物僅適用于蛋雞特定生產(chǎn)階段，試驗期應根據(jù)具體情況進行調(diào)整并說明調(diào)整的理由，但不得少于28d，而且應考察對該營養(yǎng)素敏感的特異性指標。
4.2.7 觀察與檢測
4.2.7.1 臨床觀察
試驗期內(nèi)應每天觀察試驗蛋雞臨床表現(xiàn)、采食情況、飲水情況、糞便情況、生長情況、產(chǎn)蛋情況和蛋品質(zhì)情況，詳細記錄不良反應。對試驗中出現(xiàn)的不明原因的死亡應及時進行尸檢，如有條件，宜進行組織學分析。
4.2.7.2 生產(chǎn)性能測定
按照NY/T 823相關規(guī)定，測定和計算蛋雞生產(chǎn)性能相關指標。育雛期、育成期、預產(chǎn)蛋期蛋雞飼養(yǎng)試驗應測定采食量、始末體重、體重均勻度、脛骨長度、脛長整齊度、日增重、飼料轉(zhuǎn)化率、死亡率和淘汰率等指標。產(chǎn)蛋期蛋雞飼養(yǎng)試驗應測定采食量、產(chǎn)蛋率、蛋重、產(chǎn)蛋量、飼料轉(zhuǎn)化率、破蛋率、軟蛋率、商品蛋合格率、死亡率和淘汰率等指標。
4.2.7.3 蛋品質(zhì)檢測
試驗開始和試驗結束時（必要時增加試驗中期），產(chǎn)蛋期蛋雞飼養(yǎng)試驗應根據(jù)試驗目的測定雞蛋品
質(zhì)相關的全部或部分指標，如蛋黃顏色、蛋殼顏色、蛋白高度、蛋殼強度、蛋殼厚度、哈氏單位、蛋黃比例、蛋清比例、蛋殼比例、蛋形指數(shù)等。
4.2.7.4 血液學和臨床生理生化指標檢測
試驗開始和試驗結束（必要時增加試驗中期）時每重復組隨機抽檢至少2只代表性蛋雞，分別采集血樣進行血常規(guī)（指標）、血液生化指標及其他與受試物相關的各種血液生化參數(shù)的檢測。血常規(guī)指標主要包括白細胞計數(shù)（WBC）及分型、紅細胞計數(shù)（RBC）、血紅蛋白（HGB）、紅細胞壓積（HCT）、血小板計數(shù)（PLT）等指標；血液生化指標主要包括谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸基轉(zhuǎn)移酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、總蛋白（TPRO）、白蛋白（ALB）、尿素氮（UN）、尿酸（UA）、肌酐（CRE）、血糖（GLU）、總膽紅素（TBILI）等指標。
4.2.7.5 組織病理學檢查
4.2.7.5.1 尸體解剖學檢查：試驗結束時，每重復組隨機抽檢至少2只代表性蛋雞，進行系統(tǒng)屠宰解剖學檢查，為進一步的組織學檢查提供依據(jù)。
4.2.7.5.2 臟器系數(shù)（指數(shù)）測定：試驗結束時，每重復組隨機抽檢至少2只代表性蛋雞，剖檢取心、肝、脾、肺、腎等臟器稱重，并計算臟器系數(shù)。
4.2.7.5.3 組織病理學檢查：試驗結束時，對多倍劑量組及尸檢異常動物的主要器官進行系統(tǒng)的組織病理學檢查，詳細檢查的器官和組織包括：心、肝、脾、肺、腎、胸腺、胰腺、胃、十二指腸、回腸、直腸、骨髓等組織。
4.2.7.6 其他特異性觀測指標
如有必要，根據(jù)受試物的作用特點和用途，增加相應的特異性觀測指標和敏感性指標。
4.2.8 方案確認
試驗設計完成后，形成書面試驗方案，且應經(jīng)試驗負責人簽字確認。
4.3 飼糧配制
4.3.1 根據(jù)飼料原料和飼料添加劑的國家標準、行業(yè)標準或企業(yè)標準，選擇符合質(zhì)量要求的飼料原料和飼料添加劑，衛(wèi)生標準應符合GB13078規(guī)定。按照試驗方案確定的配方和工藝，進行飼糧配制。飼糧在配制、貯運過程中避免受到污染。
4.3.2 根據(jù)受試物特性及使用方法確定飼糧加工方法、飼糧類型、粒度等。各處理間試驗因子以外的其他因素，如粒型、粒度、加工方法等，應保持一致。
4.3.3 按照GB/T 14699.1采集試驗所用飼料（包括飼料原料和飼糧）樣品，根據(jù)國家或行業(yè)標準所規(guī)定的方法測定常規(guī)營養(yǎng)成分含量和受試物有效成分含量，證實所配制的飼糧滿足配方設計的要求后進入試驗實施階段。
4.4 試驗實施
4.4.1 飼養(yǎng)管理
4.4.1.1 飼養(yǎng)開始前，檢查、安裝和調(diào)試飼養(yǎng)設施及設備，確保設施及設備性能完好。使用前1周對飼養(yǎng)設施設備及圈舍進行清理、消毒。
4.4.1.2 試驗雞舍內(nèi)溫度、濕度、風速、照度等環(huán)境參數(shù)應符合NY/T 388的要求并參照相應品種飼養(yǎng)管理手冊執(zhí)行。當環(huán)境參數(shù)的空間分布均勻一致時，處理和重復組的空間位置應隨機安排；當環(huán)境參數(shù)
出現(xiàn)空間分布不均勻時，根據(jù)差異進行隨機區(qū)組安排。如試驗目的有特殊要求，應按需求重新設定環(huán)境參數(shù)。
4.4.1.3 試驗雞的飼養(yǎng)方式、飼養(yǎng)管理、免疫程序應保持完全相同。免疫措施不應干擾受試物的作用模式。
4.4.1.4 根據(jù)試驗雞品種、氣候溫濕度、試驗舍通風降溫條件等確定適宜的飼養(yǎng)密度。
4.4.1.5 試驗雞飲水供應充足，水質(zhì)應符合GB5749規(guī)定，自由飲水。
4.4.2 臨床觀察
試驗期內(nèi)每天觀察試驗動物臨床表現(xiàn)、采食、飲水、排泄、產(chǎn)蛋情況，觀察并記錄死淘情況。
4.4.3 指標檢測
4.4.3.1 生產(chǎn)性能測定按照4.2.6.2進行。
4.4.3.2 蛋品質(zhì)檢測按照4.2.6.3進行。
4.4.3.3 血液生化指標檢測按照4.2.6.4進行。
4.4.3.4 組織病理學檢查按照4.2.6.5進行。
4.4.3.5 檢測方法應采用國家標準、行業(yè)標準或國際公認方法。如果采用文獻報道方法或新建方法，應提供方法確證的數(shù)據(jù)資料，說明其合理性。
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